基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究

编号 zgly0000807328

文献类型 期刊论文

文献题名 基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究

作者 张琳  马利  逯茂洋  胡北侠  杨少华  张秀美 

作者单位 山东省农业科学院  山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室  山东农业大学动物科技学院  中国农业大学动物医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(10)

页码 38-44

年份 2012 

分类号 S852 

关键词 传染性支气管炎病毒  环介导等温扩增  荧光显色  钙黄绿素 

文摘内容 【目的】:建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒(IBV)环介导等温扩增(LAMP)检测体系, 为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】:根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物, 通过对反应体系各组分和条件的优化, 建立IBV LAMP检测方法, 并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂, 对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测, 比较2种方法的阳性检出率。【结果】:成功建立了IBV LAMP检测方法, 该方法能够在等温(63 ℃)条件下1 h内完成反应, 具有良好的敏感性和特异性, 最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒, 比普通PCR方法敏感100倍, 而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时, 阴阳性样品均有强烈的颜色对比, 其中0.05 mmol/L钙黄绿素与0.6 mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断, 其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中, LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】:建立了基于荧光显色的IBV LAMP检测方法, 该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。