基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病

编号 zgly0001674862

文献类型 期刊论文

文献题名 基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病

作者 赵媛媛  沈丹宇  于佳  徐衡  窦道龙 

作者单位 南京农业大学植物保护学院 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2019年03期

年份 2019 

分类号 S435.131 

关键词 强雄腐霉  环介导等温扩增  快速检测  羟基萘酚蓝(HNB) 

文摘内容 为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度和实际应用效果进行评估。25μL LAMP最终反应体系为:10×ThermoPol Buffer 2.5μL、10 mmol/L dNTPs 3.5μL、6 mmol/L MgSO4 2μL、5 mol/L甜菜碱4μL、40μmol/L FIP-1/BIP-1各1μL、5μmol/L F3-1和B3-1各1μL、40μmol/L LB-1 1μL、Bst DNA polymerase 1μL、2.5 mmol/L HNB 1.9μL、模板DNA 2μL、灭菌水3.1μL。LAMP体系在等温64℃条件下反应60 min,HNB显色反应显示天蓝色即为阳性反应;扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性检测结果显示,LAMP体系能特异性地检测出强雄腐霉,而其它卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检测出。灵敏度检测结果显示,LAMP体系的最低检测灵敏度为10 pg/μL,是普通PCR反应灵敏度的1 000倍。在实际应用中,LAMP体系能够快速检测出人工接种和实际发病玉米组织中的病原菌。表明本研究建立的快速、准确、可视化的LAMP检测方法能在60 min内检测出强雄腐霉。