可视化环介导等温扩增技术检测Phytophthora tentaculata

编号 zgly0001480907

文献类型 期刊论文

文献题名 可视化环介导等温扩增技术检测Phytophthora tentaculata

作者 戴婷婷  康振烨  吴小芹 

作者单位 南京林业大学南方现代林业协同创新中心  江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室南京林业大学林学院 

母体文献 南京林业大学学报(自然科学版 

年卷期 2015年06期

年份 2015 

分类号 S763 

关键词 Phytophthora tentaculata  环介导等温扩增  PtYpt1  羟基萘酚蓝(HNB) 

文摘内容 为了能在植物发病早期快速、准确地鉴定出Phytophthora tentaculata引起的疫病,控制疫病的传播和流行,减少其造成的经济损失,笔者以Ypt1基因为靶序列应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal am-plification,LAMP),建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的P.tentaculata检测方法。结果表明:在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应80 min,反应后经2%琼脂糖凝胶电泳和扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂验证扩增结果,在特异性实验中,P.tentaculata菌株能够扩增到梯形状的条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而从其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PtYpt1-LAMP技术最低检测限为1 ng/μL。