环介导等温扩增(LAMP)技术检测东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的研究

编号 zgly0001544532

文献类型 期刊论文

文献题名 环介导等温扩增(LAMP)技术检测东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的研究

作者 席伟军  陈大福  郭睿  李江红  梁勤  苏晓玲  赵东绪  华启云 

作者单位 福建农林大学蜂学学院  金华市农业科学研究院 

母体文献 环境昆虫学报 

年卷期 2017年01期

年份 2017 

分类号 S895 

关键词 环介导等温扩增  东方蜜蜂微孢子虫  快速检测 

文摘内容 应用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种准确、灵敏、快速的蜜蜂微孢子虫检测方法。本研究根据东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae的依赖DNA的RNA聚合酶Ⅱ大亚基(RPB1)序列,用在线软件Primer Explorer V4.0 online设计4条特异性引物,分别对Mg2+、d NTP、内引物FIP/BIP和甜菜碱浓度及反应温度和时间优化;选择蜜蜂体内常见病原进行该方法的特异性验证,用MseⅠ酶切扩增产物验证其准确性;将N.ceranae的DNA梯度稀释进行灵敏度检测并与PCR比较分析;最后在临床检测中验证该技术的可行性。结果表明,优化的体系可在恒温57℃下完成扩增反应;引物的病原特异性检测仅N.ceranae有梯状条带,MseⅠ酶切产物条带符合理论值;LAMP反应检测的灵敏度较PCR高10倍;能够直接从蜜蜂体内检测出N.ceranae。本研究建立的LAMP检测N.ceranae体系准确、快速、成本低,可为蜜蜂微孢子虫病的检测提供有力的技术支撑。