番石榴焦腐病菌LAMP检测方法的建立及应用

编号 zgly0001445721

文献类型 期刊论文

文献题名 番石榴焦腐病菌LAMP检测方法的建立及应用

作者 吴敏亮  张溢溪  兰成忠  刘裴清  李本金  陈庆河  翁启勇 

作者单位 福建农林大学植物保护学院  福建省农业科学院植物保护研究所 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S436.67 

关键词 番石榴  葡萄座腔菌  内转录间隔区  环介导等温扩增  钙黄绿素 

文摘内容 以钙黄绿素(calcein)为指示剂,建立了番石榴焦腐病菌(Botryosphaeria rhodina)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测方法。在该方法中,以番石榴焦腐病菌特异的核糖体转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列为目的 DNA片段,设计4条引物(2条内引物、2条外引物),优化LAMP反应条件和反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。研究确定最佳反应温度为64℃,反应时间1 h;特异性检测结果显示,15株不同地理来源的番石榴焦腐病菌和10份番石榴焦腐病病果组织LAMP产物均为阳性(绿色),而26株其它病原菌及10份健康番石榴果实组织LAMP产物均为阴性(橘黄色);灵敏度验证结果显示,该方法的检测灵敏度在DNA水平上可达到10 pg。实验结果表明,快速、准确、灵敏的LAMP检测方法适合基层部门及田间检测番石榴焦腐病菌使用。