猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达

编号 zgly0001412454

文献类型 期刊论文

文献题名 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达

作者 孙岩  胡健  温俊歌  郜原  薄联锋  徐志坤  吴耀丽  张德礼 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年09期

年份 2011 

分类号 S828  Q785 

关键词 猪PKR基因  克隆  原核表达  真核表达 

文摘内容 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。