绿色木霉内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的克隆及其表达

编号 zgly0001743215

文献类型 期刊论文

文献题名 绿色木霉内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的克隆及其表达

作者 闫建英  张智  冯丽荣  汤华京  杨可心  魏罡  张晓彤 

作者单位 东北林业大学林学院  黑龙江国宏节能环保有限公司 

母体文献 中南林业科技大学学报 

年卷期 2022,42(7)

页码 169-177

年份 2022 

分类号 S718.521.3 

关键词 绿色木霉  内切葡聚糖酶  克隆  枯草芽孢杆菌  酶学性质 

文摘内容 【目的】在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因EgⅦ。研究内切葡聚糖酶基因EgⅦ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质。【方法】提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA,通过反转录合成cDNA,并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因EgⅦ,并进行生物信息学分析;构建了重组表达载体pMA5-EgⅦ,并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)WB600感受态细胞中,成功进行表达。【结果】生物信息学分析表明,内切葡聚糖酶基因EgⅦ编码249个氨基酸,蛋白质的分子量为26.8002 KD,理论等电点7.62,属于胞外蛋白;预测蛋白质三级结构与二级结构一致,由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成。电泳结果表示,重组枯草芽孢杆菌在EgⅦ基因片段大小符合处出现条带,表明成功将EgⅦ-pMA5转化到B.subtilis WB600中。刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈,重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL,表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ可以在枯草芽孢杆菌中表达,并具有较高活性。重组酶酶学性质分析表明,该酶的最适温度是60℃,最适pH值为6.4,且温度在50℃以下,pH值在5.6~8.0范围内,酶活力具有良好的稳定性。【结论】通过对内切葡聚糖酶基因EgⅦ克隆及分析,获得了表达内切葡聚糖酶基因EgⅦ的枯草芽孢杆菌基因工程菌,了解了重组酶酶学性质,为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础。