H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达

编号 zgly0001393223

文献类型 期刊论文

文献题名 H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达

作者 王晶钰  刘红彦  李河林  张三东  柳超  温肖会  雷萌桐 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  陕西杨凌绿方生物工程有限公司 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年10期

年份 2010 

分类号 S852.65 

关键词 H9N2亚型禽流感病毒  NS1基因  大肠杆菌  293细胞  原核表达  真核表达 

文摘内容 【目的】构建H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因的原核和真核表达载体,将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达,为进一步研究NS1蛋白的功能及其与宿主的相互作用,以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽ELISA诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用RT-PCR方法扩增H9N2亚型AIV的NS1基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中构建NS1基因的原核重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;同时,将NS1基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建NS1基因真核重组质粒,将其瞬时转染293细胞,48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行Western-blotting分析。【结果】成功构建了NS1基因的原核表达载体pET-32a-NS1和真核表达载体pEGFP-C1-NS1。Western-blotting结果表明,大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带(大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带,293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带)。【结论】NS1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达,获得的NS1蛋白具有良好的抗原活性。