玉米ZmICS1和ZmSARD1的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0001744685

文献类型 期刊论文

文献题名 玉米ZmICS1和ZmSARD1的原核表达及多克隆抗体制备

作者 上官晓庆  张春霞  赵天永 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报:自然科学版 

年卷期 2022,50(9)

页码 18-24

年份 2022 

分类号 S513  Q78 

关键词 玉米  ICS1蛋白  SARD1蛋白  原核表达  抗体制备 

文摘内容 【目的】将玉米异分支酸合成酶1(ZmICS1)及系统获得抗性缺陷1(ZmSARD1)进行原核表达和纯化,并免疫家兔获得多克隆抗体,为深入研究ZmICS1和ZmSARD1在玉米抵抗病原菌胁迫中的功能奠定基础。【方法】克隆玉米ZmICS1和ZmSARD1基因CDS区,连接到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His_(×6)-ZmICS1和His_(×6)-ZmSARD1重组蛋白,以透析纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体,并进行验证和检测。【结果】成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmICS1和pET-28a-ZmSARD1,于37℃、0.84 mmol/L IPTG在大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2(DE3)中诱导出His_(×6)-ZmICS1和His_(×6)-ZmSARD1重组蛋白。纯化蛋白免疫家兔,所得ZmICS1抗体能够检测到3 ng的His_(×6)-ZmICS1,ZmSARD1抗体能检测到低至0.3 ng的His_(×6)-ZmSARD,且分别能特异性地检测玉米B73原生质体过表达的ZmICS1和ZmSARD1蛋白。【结论】成功制备了玉米ZmICS1、ZmSARD1多克隆抗体,可用于玉米内源ZmICS1和ZmSARD1蛋白含量的检测。