中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱

编号 zgly0001478121

文献类型 期刊论文

文献题名 中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱

作者 吉挺  沈芳  梁勤  吴黎明  刘振国  罗岳雄 

作者单位 扬州大学动物科学与技术学院  福建农林大学蜂学院  中国农业科学院蜜蜂研究所  广东省昆虫研究所 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2014年08期

年份 2014 

分类号 S891 

关键词 中华蜜蜂  OBP3基因  基因克隆  原核表达  组织表达谱  抗体制备 

文摘内容 【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。