中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达

编号 zgly0001528267

文献类型 期刊论文

文献题名 中华蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表达

作者 吴鹏杰  金红岩  徐进  武江利  李雨时  郭岳琴  姚军  徐书法  吴杰 

作者单位 中国农业科学院蜜蜂研究所农业部授粉昆虫生物学重点实验室  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2016年12期

年份 2016 

分类号 Q78  S891 

关键词 中华蜜蜂  SRP9  基因克隆  序列分析  结构预测  原核表达 

文摘内容 【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用Predice Protein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化。【结果】扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为Acc SRP9。该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 k D,等电点为9.17。系统进化树分析表明,Acc SRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区。利用同源建模获得蛋白质的三维结构。将Acc SRP9连入表达载体p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白p GEX-6P-1-SRP9。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料。