拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0001533260

文献类型 期刊论文

文献题名 拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC的原核表达及多克隆抗体制备

作者 王玥  梁爽  梁慧珂  郁飞  齐亚飞 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2016年10期

年份 2016 

分类号 Q946 

关键词 叶绿体  PAC蛋白  原核表达  抗体制备 

文摘内容 【目的】将拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC进行大肠杆菌原核表达和纯化,并免疫家兔,获得针对PAC蛋白的多克隆特异性抗体,为进一步研究PAC蛋白在叶绿体发育中的功能提供保证。【方法】将编码拟南芥PAC蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28a中,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导后,对诱导产生的PAC蛋白进行镍柱亲和纯化和SDS-PAGE割胶纯化,并将纯化的PAC蛋白通过皮下注射免疫家兔,利用分离得到的抗血清,针对拟南芥野生型、PAC敲除突变系pac-1和PAC过表达系PACOE的总蛋白进行免疫印迹检测。【结果】成功构建了拟南芥基因PAC的原核表达载体pET-28a-PAC,在37℃、1mmol/L IPTG诱导4h的大肠杆菌细胞中,可检测到分子质量为38.9ku的重组蛋白,其大部分以可溶形式存在。用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得PAC抗血清,该抗血清能够有效地检测出1ng原核表达的PAC重组蛋白,并在植物样品中检测出1条分子质量约为35ku的条带。【结论】成功制备了PAC蛋白的多克隆抗体,可用于植物中PAC蛋白含量的检测。