飞蝗羧酸酯酶基因LmCarE25的体外重组表达

编号 zgly0001447736

文献类型 期刊论文

文献题名 飞蝗羧酸酯酶基因LmCarE25的体外重组表达

作者 王建新  张学尧  张建琴  张建珍  郭亚平  马恩波 

作者单位 山西大学应用生物学研究所  山西大学生命科学学院 

母体文献 应用昆虫学报 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 S433.2 

关键词 飞蝗  羧酸酯酶  real-time PCR  原核表达  真核表达 

文摘内容 羧酸酯酶(Carboxylesterase,CarE)是一类在生物中广泛分布的多功能家族酶系,在昆虫抗药性形成机制中发挥重要作用。为探讨飞蝗Locusta migratoria(Meyen)羧酸酯酶基因LmCarE25的生物学功能,本文采用荧光实时定量PCR技术进行研究,发现其在飞蝗成虫各组织部位均有表达,其中胃盲囊、翅和肌肉中表达量较低,中肠、马氏管和脂肪体表达量较高。本文尝试在大肠杆菌和昆虫细胞体外重组表达该酶,构建重组表达载体pET32a-LmCarE25,SDS-PAGE结果显示,LmCarE25可在大肠杆菌BL21(DE3)和JM109中表达,蛋白分子量约为60 ku,但为包涵体;将LmCarE25基因插入真核表达载体pFastBacHTA中,借助Bac-to-Bac体系获得重组Bacmid,以sf9细胞系作为宿主细胞表达目的蛋白,Western-Blot检测结果显示,LmCarE25获得可溶性表达。上述结果为进一步深入研究飞蝗羧酸酯酶家族功能提供了基础资料。