泛素结合酶UBE2T基因在布鲁氏菌感染过程中的作用

编号 zgly0001727609

文献类型 期刊论文

文献题名 泛素结合酶UBE2T基因在布鲁氏菌感染过程中的作用

作者 印双红  张俊波  易萌  蔡春连  张红  王丽蓉  陆安法  陈创夫 

作者单位 铜仁学院大健康学院  铜仁学院贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室  铜仁学院农林工程与规划学院  铜仁市动物疫病预防控制中心  石河子大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报:自然科学版 

年卷期 2021,49(4)

页码 19-28

年份 2021 

分类号 S855.99  Q78 

关键词 布鲁氏菌  泛素结合酶E2T基因  RNA干扰  真核表达  胞内增殖 

文摘内容 [目的]探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在布鲁氏菌感染过程中的功能。[方法]构建UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,对其进行PCR和EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切验证,并将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBE2T基因过表达效果。设计并合成3条UBE2T基因沉默表达的siRNA(UBE2T-379-siRNA、UBE2T-599-siRNA和UBE2T-661-siRNA),将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用qRT-PCR检测UBE2T基因沉默表达效果。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验,检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性的影响。利用qRT-PCR,检测M5-90感染对RAW264.7细胞UBE2T基因相对表达量的影响,以及对过表达或沉默表达UBE2T基因的RAW264.7细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)基因相对表达量的影响。用布鲁氏菌M5-90菌株感染过表达和沉默UBE2T基因的RAW264.7细胞,用活菌计数法检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞内布鲁氏菌增殖的影响,利用相应的试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性及白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和γ-干扰素(IFN-γ)等细胞因子的水平。[结果]成功构建了UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,过表达效果良好。3条siRNA中,UBE2T-661-siRNA的干扰效果最佳,其对UBE2T基因的沉默效率为84%。UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性无影响。M5-90感染可提高RAW264.7细胞UBE2T的表达量;沉默UBE2T可提高M5-90介导的NLRP3和Caspase-1的表达,而过表达UBE2T会抑制M5-90介导的NLRP3表达,提高M5-90介导的Caspase-1表达。沉默表达UBE2T可抑制胞内M5-90的增殖,而过表达UBE2T可促进胞内M5-90的增殖。沉默表达UBE2T可抑制M5-90介导的LDH水平,提高Caspase-3活性及IFN-γ、IL-6和IL-1β水平;而过表达UBE2T可提高M5-90介导的LDH水平,抑制Caspase-3的活性及IFN-γ、IL-1β水平。[结论]泛素结合酶UBE2T对胞内布鲁?