黑曲霉N25植酸酶phyA基因在巴斯德毕赤酵母中高效表达的研究

编号 zgly0001241784

文献类型 期刊论文

文献题名 黑曲霉N25植酸酶phyA基因在巴斯德毕赤酵母中高效表达的研究

作者 王红宁  马孟根  吴琦  刘世贵  罗燕 

作者单位 四川农业大学动物科技学院  四川大学生命科学学院  四川农业大学动物科技学院 四川·雅安625014四川大学生命科学学院成都610041  四川·雅安625014  成都610041  四川·雅安625014 

母体文献 菌物系统 

年卷期 2001年04期

年份 2001 

分类号 Q786 

关键词 黑曲霉  植酸酶  phyA基因  毕赤酵母  高效表达 

文摘内容 从黑曲霉N25(A.niger China strain)中提取出染色体DNA,根据已经测定出的植酸酶phyA基因全序列设计了一对引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF扩增到了去除信号肽和内含子后约1.4kb片段,对该片段进行了克隆及序列测定。将该序列与植酸酶phyA基因全序列进行了比较。以此片段构建成功了pPIC9K-phyA载体(命名为pPNP-1),并转化毕赤巴斯德酵母。经G418抗性筛选、酶活性测定、Southern印迹和Western印迹,获得了高效表达的转化子PP-NP-1(23869.4u/ml)、PP-NP-2(20533.0u/ml)、PP-NP-3(35646.7u/ml),其酶活性分别是出发菌株的酶活(513.4u/ml)的46.46倍、39.99倍和69.46倍,且转化子具有很好的遗传稳定性。