枯草芽孢杆菌bioI基因的克隆和高效表达及BioI蛋白的纯化

编号 zgly0001334617

文献类型 期刊论文

文献题名 枯草芽孢杆菌bioI基因的克隆和高效表达及BioI蛋白的纯化

作者 龚月生  王晶  刘锦妮  袁新宇  姬生跃  王俊  杨明明 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院  武汉阳光广济医药开发有限公司  湖北工业大学生物工程学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年12期

年份 2008 

分类号 Q78  Q93 

关键词 枯草芽孢杆菌  bioI基因  大肠杆菌BL21(DE3)  高效表达 

文摘内容 【目的】克隆和表达枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)bioI基因并纯化表达产物。【方法】提取B.sub-tilis1A747基因组DNA,从中扩增bioI基因并将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)的表达载体pET-28a(+)上,构建bioI的表达载体pET28a-bioI。将重组质粒pET28a-bioI电转化到大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,对表达产物BioI用Ni2+-NAT亲和层析树脂进行纯化,并对纯化蛋白进行波长扫描。【结果】成功构建了表达载体pET28a-bioI,酶切鉴定结果正确并在大肠杆菌中表达成功,经IPTG诱导8 h后,重组蛋白BioI的表达量占总可溶性蛋白的20%;波长扫描发现,重组蛋白BioI在400 nm处有特征吸收峰。【结论】bioI基因克隆表达成功,其表达产物BioI具有P450蛋白的特征,为蛋白性质的进一步研究和抗体的制备奠定了基础。