蓝细菌Synechococcus sp. PCC 7002 petH基因的高效表达及其产物的纯化

编号 zgly0001197107

文献类型 期刊论文

文献题名 蓝细菌Synechococcus sp. PCC 7002 petH基因的高效表达及其产物的纯化

作者 李荣贵  赵进东  吴光耀  吴相钰 

作者单位 北京大学生命科学学院 

母体文献 植物学报 

年卷期 1998年09期

年份 1998 

分类号 Q946 

关键词 petH基因  FNR  电子传递  高效表达  蛋白质重折叠 

文摘内容 铁氧还蛋白 ＮＡＤＰ＋氧还酶（ＦＮＲ）是光合电子传递中的关键酶之一。蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７００２中编码ＦＮＲ的ｐｅｔＨ基因被克隆到表达载体ｐＥＴ ３ｄ上，在大肠杆菌中得到了高效表达，其表达量占大肠杆菌总蛋白的５０％以上。高效表达的产物以可溶性和包含体两种形式存在。可溶性部分具有ＦＮＲ的酶活性，在经过离子交换和凝胶层析后产生了电泳纯的ＦＮＲ。包含体形式的部分经６７ｍｏｌ／Ｌ尿素变性后，可在有黄素腺嘌呤二核苷酸（ＦＡＤ）存在条件下重新折叠成有活性的ＦＮＲ。这两种方式的ＦＮＲ其吸收光谱与从蓝细菌分离的ＦＮＲ的相同，吸收峰位置在２７３ｎｍ、３８５ｎｍ和４５６ｎｍ。氨基末端氨基酸序列分析表明此表达产物确为ｐｅｔＨ所编码。高效表达的ＦＮＲ能催化从Ｐ７００到ＮＡＤＰ＋的电子传递。其黄递酶的酶活性最适ｐＨ为８０，最适温度为３０℃。