小鼠Lin28基因的克隆及原核表达

编号 zgly0000774061

文献类型 期刊论文

文献题名 小鼠Lin28基因的克隆及原核表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 宁方勇  王春生  张秋婷  安星兰  朴善花  安铁洙 

作者单位 东北林业大学生命科学学院  东北农业大学动物科技学院 

母体文献 中国实验动物学报 

年卷期 2011,19(6)

页码 456-460

年份 2011 

分类号 Q95-33 

关键词 ICR小鼠  Lin28  克隆  原核表达 

文摘内容 目的探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法。方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(NcoⅠ及XhoⅠ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列;将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上。对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA(NM_145833)相比同源性为99.37%,与参照氨基酸序列相比同源性为100%;在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质。结论利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础。