人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定

编号 zgly0000503991

文献类型 期刊论文

文献题名 人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定

作者 谷福  游淳  刘建平  程鏖  余垚  王翔  万大方  顾建人  袁汉英  李育阳  吕红  沈岩 

作者单位 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室  上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室  山西省食品质量监督检验中心 

母体文献 中国科学: C辑 

年卷期 2007,37(1)

页码 6-14

年份 2007 

分类号 Q959.483 

关键词 POLλ2  基因克隆  表达  纯化  DNA聚合酶活性  肝癌 

文摘内容 发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因, 是POLλ的一个剪接体, 命名为POLλ2.该剪接本的cDNA长2206 bp, 包含一个1452 bp的开放阅读框, 编码482个氨基酸, 位于入10号染色体长臂24区, 长约7.9kb, 包含8个外显子和7个内含子。生物信息学分析表明, POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源, 并含有这个家族特有结构域POLx, 因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员。该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank, 登录号为AY302442.亚细胞定位实验证实, POLλ2蛋白定位于细胞核; 入16种组织表达谱实验表明, POLλ2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达, 在卵巢组织中低表达, 而在其他组织中没有检测到表达。癌和癌旁表达实验表明, 与正常肝组织和癌旁组织相比, 在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ2调表达, 导致POLλ和POLλ2的mRNA分子的比例异常, 可能和肝癌的病理过程有关。通过筛选菌株, Ecoli BL2I(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白; 通过Ni-NTA resin和Superdex-75纯化了POLλ重组蛋白。经过同位素α-^32p—dCTP掺入实验, 证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性。