金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测

编号 zgly0001394522

文献类型 期刊论文

文献题名 金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测

作者 张洪波  杨宏军  葛利江  何洪彬  杨少华  王长法  高运东  仲跻峰 

作者单位 山东省农业科学院奶牛研究中心  山东农业大学动物医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年03期

年份 2011 

分类号 S852.611 

关键词 金黄色葡萄球菌  血浆凝固酶  克隆  表达  活性分析 

文摘内容 【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性。【方法】用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2 106 bp的Coa基因,其包含1个完整的开放阅读框,编码含701个氨基酸的成熟多肽;IPTG诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100 ku,目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%;纯化的重组蛋白含量为0.047 mg/mL,其对兔血浆凝固效价为0.012 mg/mL。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌Coa基因,Coa凝固血浆效价为0.012 mg/mL。