对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1Aa基因的分离克隆及表达

编号 zgly0000312286

文献类型 期刊论文

文献题名 对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1Aa基因的分离克隆及表达

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 姚江  黄大Fang 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2003,46(2)

页码 150-155

年份 2003 

分类号 Q965.8 

关键词 苏云金芽孢杆菌  Ly30菌株  cry1Aa基因  克隆  表达  杀虫活性 

文摘内容 Bt菌Ly30株是我国自行分主了的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌, 经CAPS(cleaved amplified polymorphic sequences)系统鉴定, 它含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法, 设计一对特异引物, 分别引入NcoI和Bam H I/NcoI酶切位点。以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因, 与表达载体pKK233-2相应酶切产物连接, 转化大肠杆菌, 获得含有cry1Aa基因重组质粒pKKLy1Aa。完成了该基因的亚克隆和序列测定, 结果表明, 该基因的编码区为3531bp,编码蛋白分子量为133.2kD, 含1176个氨基酸, 等电点pl为4.99。该基因序列已在GenBank中登记注册, 登录号为AF384211, 并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa12。对重组菌KKLy1Aa进行诱导表达研究。在0.6mmol/L IPTG、37℃、8h培养条件下, 该基因获得高效表达, SDS-PAGE电泳检测到明显的133.2kD蛋白带。室内生测结果表明, Cry1Aa蛋白对不同的小菜蛾品系均有较高的杀虫活性, 其LC50值分别为0.203μg/mL和0.554μg/mL。