苏云金芽孢杆菌Ly30株cry1Ac基因的克隆及表达

编号 zgly0000312323

文献类型 期刊论文

文献题名 苏云金芽孢杆菌Ly30株cry1Ac基因的克隆及表达

作者 姚江  张杰  宋福平  李长友  刘旭光  黄大昉 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室 

母体文献 农业生物技术学报 

年卷期 2003,11(5)

页码 516-519

年份 2003 

分类号 Q939.1  S476.11 

关键词 苏云金芽孢杆菌  克隆  表达  杀虫活性  cry1Ac基因 

文摘内容 Bt菌Ly30株是中国自行分离的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt), 经CAPS(cleaved amplified polymorphic sequences)系统鉴定。它含有cry1Ac基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法, 设计1对特异引物, 分别引入SalⅠ和BamHⅠ酶切位点。以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Ac全长基因, 与表达载体pET-21b相应的酶切产物连接, 转化大肠杆菌(Eschrichia coli), 获得含有cry1Ac基因重组质粒pEKLy1Ac。该基因的亚克隆和序列测定结果表明, 其编码区为3534bp。编码蛋白分子量为133.5kD, 含1177个氨基酸, 等电点为4.8, 与CrylAc3同源性最高, 存在4个氨基酸的差异, 与Cry1Ac10之间则有6个氨基酸的不同。该基因序列已在GenBank中登记注册为AF482767, 并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Ac14该基因经诱导获得高效表达, SDS-PAGE电泳检测到明显的133.5kD蛋白带。室内生物测定结果表明, 诱导表达的Cry1Ac蛋白对棉铃虫、甜菜夜蛾等鳞翅目害虫幼虫均有较高的杀虫活性, 其LC5o值分别为19.236和3276μg/g饲料。