链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析

编号 zgly0001495782

文献类型 期刊论文

文献题名 链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析

作者 佟雨航  谭笑  杜茜  张正坤  徐文静  路杨  李启云 

作者单位 吉林农业大学农学院  吉林省农业科学院植物保护研究所/农业部东北作物有害生物综合治理重点实验室/吉林省农业微生物重点实验室 

母体文献 中国生物防治学报 

年卷期 2015年06期

年份 2015 

分类号 S476.1 

关键词 胆固醇氧化酶  克隆  表达  活性分析 

文摘内容 胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase,EC 1.1.3.6)是胆固醇降解代谢过程中的关键酶,在食品开发、医疗保健、临床检测、生物农药等方面具有广泛的应用价值。通过PCR方法从链霉菌Streptomyces ahygroscopicus 769的基因组中扩增得到769_Ch OA基因(Gen Bank accession No.KF290994)。该基因全长为1578 bp,编码一个由525 aa组成的蛋白质,蛋白理论分子量为57 k Da,等电点为6.29。769_Ch OA与来源于S.natalensis的胆固醇氧化酶基因的同源性为91%。构建了硫氧还蛋白-769_Ch OA融合的表达载体p ET32a::769_Ch OA,以Escherichia coli Origami B(DE3)为表达宿主,获得了能可溶性表达的胆固醇氧化酶重组菌。经Ni亲和层析纯化得到的酶蛋白比活力为5.90 U/mg。酶学性质分析表明,该酶对胆固醇的催化活性最高,对测定的7种胆固醇类似物也都具有一定的催化能力。酶的最适温度和p H范围为20~40℃和p H 6.0~8.5,其活性均高于80%,且在30℃和p H 7.0时表现出最大的活性,酶活分别达到6.83和6.44 U/mg。酶在低于40℃和弱碱性条件下具有很好的稳定性。该酶对鳞翅目害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)和水稻二化螟Chilo suppressalis(Walker)幼虫具有很强的杀虫活性,半致死浓度分别为27.4和17.1μg/m L。