苦瓜MAP30蛋白功能区段缺失体构建及其生物活性研究

编号 zgly0000528435

文献类型 期刊论文

文献题名 苦瓜MAP30蛋白功能区段缺失体构建及其生物活性研究

作者 刘思  林育泉  周鹏  陈海宁  符兆理 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所  山东省干细胞工程技术研究中心  海南国栋药物有限公司 

母体文献 药物生物技术 

年卷期 2007,14(6)

页码 391-396

年份 2007 

分类号 S642.5 

关键词 MAP30  功能区段  克隆  表达  活性分析 

文摘内容 通过PCR技术从质粒pET30a-MAP30中分别得到编码M1(D1-K195)、M2(D1-E187)、M3(All—K195)、M4(All—E187)4个功能区段缺失体蛋白的序列，经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET22b中，表达载体用CaCl2介导的化学转化法转化E．coli BL21(DE3)感受态细胞，然后利用菌落PCR筛选阳性克隆。工程菌在28℃时经1mmol／LIPTG诱导5h时实现高效表达，4种重组蛋白在大肠杆菌中都以包涵体形式存在。利用MTT法分析4个重组蛋白复性液的抗肿瘤活性，结果表明4个功能区段缺失体重组蛋白均对人羊膜细胞系wish、鼠髓白血病细胞系NFS-60、小鼠腹水瘤细胞S-180有杀伤作用，其中对鼠髓白血病细胞系NFS-60抑制作用最明显。M1、M2、M3和M44个缺失体重组蛋白对NFS-60作用的IC60分别为2．51、2．42、1．89gg／ml和1．90gg／ml。细胞毒性分析表明，4个重组蛋白对人正常肝细胞系HL-70的细胞毒性极小，且都低于重组MAP30蛋白的细胞毒性。