烟草蚀纹病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达

编号 zgly0001317274

文献类型 期刊论文

文献题名 烟草蚀纹病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达

作者 王秀敏  吴云锋  成巨龙  张建新  杨栋  罗朝鹏 

作者单位 西北农林科技大学植保学院植物病毒研究室陕西省农业分子生物学重点实验室  陕西省烟草研究所  西北农林科技大学植保学院植物病毒研究室陕西省农业分子生物学重点实验室 陕西杨凌712100  陕西杨凌712100  陕西西安710003 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2006年06期

年份 2006 

分类号 S435.72 

关键词 烟草蚀纹病毒  外壳蛋白基因  原核表达  抗血清 

文摘内容 根据烟草蚀纹病毒(TEV)CP序列设计合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了TEV CP基因,大小为789 bp。将TEV CP基因克隆到pM D 18-T S im p le V ector,经E coRⅠ/S acⅠ双酶切得到目的片段,并将其定向插入到pET 30a载体中构建了原核表达载体pET 30-TEV CP,重组质粒经E coRⅠ和S acⅠ双酶切鉴定及基因测序验证正确后,转化大肠杆菌BL 21,用IPTG进行诱导表达。结果表明,TEV CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,分子量约为37 ku。以表达产物为抗原免疫家兔,制备了特异性抗血清,其效价为1/1 204。W estern b lot检测结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株。