‘84K’杨组氨酸激酶基因PaHK3b的克隆及功能分析

编号 zgly0001728436

文献类型 期刊论文

文献题名 ‘84K’杨组氨酸激酶基因PaHK3b的克隆及功能分析

作者 鲁俊倩  武舒  钟姗辰  张伟溪  苏晓华  张冰玉 

作者单位 林木遗传育种国家重点实验室 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2021,34(1)

页码 26-34

年份 2021 

分类号 S792.11 

关键词 银腺杨‘84K’  组氨酸激酶  表达模式  原核表达 

文摘内容 [目的]本研究克隆了银腺杨‘84K’(Populus alba×P.glandulosa‘84K’)组氨酸激酶基因PaHK3b启动子及编码区,并对其表达进行检测及功能鉴定,为深入研究PaHK3b基因在杨树生长发育的调控作用提供线索,为杨树分子育种及品种改良奠定基础。[方法]根据毛果杨(P.trichocarpa Torr.&Gray)基因组信息,设计引物克隆‘84K’杨组氨酸激酶基因PaHK3b启动子及CDS序列,并对其保守结构域和启动子顺式作用元件进行分析;同时,对‘84K’杨进行植物激素处理(10μmol·L^(?1)ABA、10μmol·L^(?1)6-BA、10μmol·L^(?1) IBA、10μmol·L^(?1) GA3及10μmol·L^(?1)水杨酸(SA))及非生物胁迫处理(42℃高温、0℃低温、200 mmol·L^(?1) NaCl和5%PEG6000),利用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测PaHK3b基因表达情况与表达响应差异,并采用原核表达方法初步确定PaHK3b基因的生物学功能。[结果]PaHK3b基因编码框区长度为3060 bp,编码1019个氨基酸,PaHK3b蛋白具有CHASE、HisKA和REC等典型的细胞分裂素受体结构域。PaHK3b基因启动子序列中不仅含有大量TATA框和CAAT框常见核心元件,还包含低温响应元件LTR、防御与胁迫响应元件TC-rich repeats、赤霉素响应元件GARE-motif、水杨酸响应元件TCA-element等顺式作用元件,这些元件与杨树的激素响应和逆境胁迫响应密切相关。qRT-PCR分析表明:PaHK3b基因在叶片中表达最高,根部中等,茎中最少;另外,与正常条件下相比,在高温、低温、NaCl及PEG处理时,PaHK3b基因表达量与对照明显增高,分别为对照的2.67、2.61、2.28、1.87倍;用IBA诱导处理时,基因表达量与对照相比差异不大,而在6-BA、ABA、GA3及SA处理时,基因表达量与对照相比均呈下调表达;在添加5%PEG6000的LB液体培养基中,转入PaHK3b基因原核表达载体的大肠杆菌菌株生长速度显著高于对照,在添加50~150 mmol·L^(?1)NaCl的LB固体培养基上,转入PaHK3b基因原核表达载体的大肠杆菌菌