犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子的原核表达

编号 zgly0001572133

文献类型 期刊论文

文献题名 犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子的原核表达

作者 金婷婷  曲光刚  王长江  武曰星  唐世云  沈志强 

作者单位 山东绿都生物科技有限公司  山东省滨州畜牧兽医研究院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2018年02期

年份 2018 

分类号 S852.723 

关键词 犬新孢子虫  巨噬细胞转移抑制因子  原核表达  免疫印迹 

文摘内容 为筛选犬新孢子虫保护性抗原,克隆表达犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子(MIF)并对其免疫原性进行分析。根据GenBank公布的犬新孢子虫MIF(NcMIF)序列,利用分子生物学软件设计2套特异性引物,以NcMIF mRNA反转录产物为模版,采用PCR扩增出NcMIF基因和2种突变基因NcMIFm和NcMIFhis,选用原核表达载体pET26b,分别构建重组质粒pET26b-NcMIF和pET26b-NcMIFm。重组质粒分别转入E.coli BL21(DE3)中进行表达,纯化后的蛋白利用免疫印迹法进行鉴定。结果显示,rNcMIF和rNcMIFm这2种重组蛋白在BL21(DE3)表达菌株中均为可溶性表达,诱导表达最佳条件为30℃诱导3h IPTG诱导浓度为1mmol/L;Western blot分析结果表明,该表达产物能与抗rNcMIF绵羊血清发生反应,说明获得的蛋白具有较好的抗原性和特异性。