大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

编号 zgly0001516833

文献类型 期刊论文

文献题名 大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

作者 张潇骏  王万能  周继红  刘钦  顾仕苓  周代君  邱俊  代维  袁丹凤  刘大维 

作者单位 重庆理工大学药学与生物工程学院  第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2016年04期

年份 2016 

分类号 S852.2 

关键词 肺表面活性蛋白B  原核表达  免疫印迹  蛋白纯化  大鼠 

文摘内容 为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。