烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达

编号 zgly0001347553

文献类型 期刊论文

文献题名 烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达

作者 赵艳艳  刘建兵  罗梅浩  郭线茹  原国辉 

作者单位 河南农业大学植物保护学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2008年11期

年份 2008 

分类号 Q966  Q78 

关键词 烟夜蛾  组织蛋白酶B  基因克隆  序列分析  原核表达  免疫印迹 

文摘内容 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。