烟夜蛾几丁质酶基因的克隆与表达

编号 zgly0001360910

文献类型 期刊论文

文献题名 烟夜蛾几丁质酶基因的克隆与表达

作者 涂洪涛  付晓伟  郭线茹  李为争  罗梅浩  原国辉 

作者单位 河南农业大学植物保护学院  中国农业科学院郑州果树研究所 

母体文献 昆虫知识 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S433  Q96 

关键词 烟夜蛾  几丁质酶  基因克隆  原核表达 

文摘内容 运用RT-PCR技术扩增编码烟夜蛾Helicoverpaassulta(Guen啨e)幼虫几丁质酶基因的cDNA片段,将其克隆至pMD18-T载体,获得该基因的成熟蛋白阅读框序列。将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T-2中,并转化入原核细胞中表达,序列测定结果表明,烟夜蛾幼虫几丁质酶基因的成熟蛋白阅读框全长1338bp,编码445个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为50.1kDa和9.26;推导的氨基酸序列与其近缘种棉铃虫几丁质酶氨基酸序列的一致性达99%,与其他6种昆虫几丁质酶的氨基酸序列也高度一致(65%~76%),并具有几丁质酶的典型特征。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上并转化BL21,SDS-PAGE和Western印迹分析表明,经IPTG诱导,76kDa附近没有特异蛋白条带出现,表明烟夜蛾几丁质酶基因不能在原核表达载体pGEX-4T-2中表达。