泡桐丛枝植原体pPaWBNy-1-ORF5编码蛋白的原核表达和抗体制备

编号 zgly0001445743

文献类型 期刊论文

文献题名 泡桐丛枝植原体pPaWBNy-1-ORF5编码蛋白的原核表达和抗体制备

作者 耿显胜  田国忠  宋传生  胡佳续  林彩丽 

作者单位 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所  国家林业局森林保护学重点实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2013年05期

年份 2013 

分类号 S763.7 

关键词 泡桐丛枝病  植原体  茶翅蝽  原核表达  免疫印迹 

文摘内容 利用含泡桐丛枝植原体质粒pPaWBNy-1的3.0 kb片段的克隆为模板,PCR扩增pPaWBNy-1-ORF5的亲水性肽段编码区。目的片段连接到原核表达载体pET28a(+),重组质粒pET28a-ORF5-5转化大肠杆菌(Escherichia coli)Rosseta(DE3)感受态细胞,菌液处在对数生长期时(OD600=0.52),添加IPTG诱导5 h后收集菌体,提取蛋白并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。用六聚组氨酸标签抗体进行Western blot检测,发现分子量约为15 kDa的含多聚组氨酸标签的目的蛋白得到表达。切胶回收融合蛋白,免疫德国大白兔以制备抗血清,间接ELISA法测定抗血清的效价约为1∶8 100。用制备的ORF5编码蛋白的抗血清进行Western blot分析,结果在带菌的介体昆虫茶翅蝽(Halyomorpha halys)中检测到大小约为17 kDa的特异蛋白条带,但在健康和感病泡桐(Paulownia sp.)及无菌茶翅蝽中均未检测到,由此推测pPaWBNy-1-ORF5蛋白与介体昆虫传播植原体有关。