泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用

编号 zgly0000663403

文献类型 期刊论文

文献题名 泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 牟海青  周涛  赵文军  朱水芳  林彩丽  李怀方  范在丰  田国忠 

作者单位 中国农业大学植物病理学系  中国检验检疫科学研究院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2011,41(2)

页码 161-170

年份 2011 

分类号 S432.1 

关键词 泡桐丛枝病  植原体  抗原膜蛋白  大肠杆菌 

文摘内容 根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches＇-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane pro-tein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因。序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%。将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达。以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PaWB-AMPD抗血清。利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体。