泡桐丛枝植原体pPaWBNy-2-ORF4编码蛋白的抗体制备和表达分析

编号 zgly0001437102

文献类型 期刊论文

文献题名 泡桐丛枝植原体pPaWBNy-2-ORF4编码蛋白的抗体制备和表达分析

作者 耿显胜  田国忠  任争光  宋传生  林彩丽 

作者单位 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所  国家林业局森林保护学重点实验室 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2013年04期

年份 2013 

分类号 S763.7 

关键词 茶翅蝽  多克隆抗体  昆虫传播  植原体 

文摘内容 以感病泡桐组培苗提取的DNA为模板,采用PCR方法扩增pPaWBNy-2-ORF4的部分片段。将目的片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,重组质粒pGEX-p2ORF4转化大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株。IPTG诱导表达,分子量约为38 kDa的含GST标签的融合蛋白得到表达。切胶回收目的蛋白,免疫大白兔制备抗血清。间接ELISA测定抗血清的效价约为1∶4 096,免疫印迹实验显示:抗血清能够与原核表达的GST融合蛋白发生特异的免疫反应,与pPaWBNy-1-ORF5的原核表达蛋白无明显的交叉反应。利用制备的抗血清,在感病泡桐饲毒的茶翅蝽中检测到分子量约为18 kDa的蛋白条带,而在无菌茶翅蝽和感病泡桐组培苗中均未检测到,表明pPaWBNy-2-ORF4在饲毒的茶翅蝽中表达,而在感病泡桐组培苗中未表达或表达量低于检测水平。据此推测,该基因参与茶翅蝽传播泡桐丛枝植原体。