弧菌琼胶酶基因在原核细胞中的高效表达及酶理化性质分析

编号 zgly0001652465

文献类型 期刊论文

文献题名 弧菌琼胶酶基因在原核细胞中的高效表达及酶理化性质分析

作者 纪伟  高兆建  柴文波  潘秋红  李春如  赵海泉 

作者单位 安徽农业大学生命科学院  徐州工程学院  浙江泛亚生物医药股份有限公司 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年22期

年份 2018 

分类号 Q78  Q55 

关键词 琼胶酶  原核表达  诱导条件优化  酶学性质 

文摘内容 现阶段野生菌株生产琼胶酶还存在诸多问题,如产酶量低、易污染、生长慢等缺点,不利于工业化大规模生产。通过分子生物学手段合成的一段弧菌琼胶酶基因agav-2,对其进行重组表达。本研究将弧菌琼胶酶基因agav-2插入原核表达载体pET30a(+)中,并转入大肠杆菌BL21(DE3),构建重组表达载体pET-30a(+)-agav-2,对构建的重组子进行诱导表达,利用DNS法测定琼胶酶酶活,对诱导条件和表达的琼胶酶酶学性质进行探究。成功构建重组表达载体pET30a(+)-agav-2,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,测定酶活58.60 U/m L,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可知表达的琼胶酶分子量为51.5 kD。诱导条件研究表明最佳诱导温度为30℃,最佳诱导时间为9 h,最佳IPTG终浓度为0.7 mmol/L。酶理化性质实验表明该琼胶酶最适温度为45℃,最适pH值为9.0,Ca2+对酶具有显著的激活作用,Mg2+、Fe3+、NH4+、K+、Na+、Mn2+、Fe2+、Ba2+、Cu2+、Ag+对琼胶酶的活力没有显著影响,而Pb2+对琼胶酶的活性有显著抑制作用。酶的稳定性实验显示,100℃处理30 min仍有一定的活性,对pH的适用范围也比较大。构建的重组表达载体pET30a(+)-agav-2,不仅具有很好的工业化生产潜力,同时考虑到琼胶酶对琼脂水解作用而呈现肉眼可见的凹陷状,重组表达载体pET30a(+)-agav-2可作为功能基因筛选的标记工具。