泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选

编号 zgly0000679889

文献类型 期刊论文

文献题名 泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选

学科分类 220.1070;森林植物学

作者 曹喜兵  何佳  翟晓巧  范国强 

作者单位 河南农业大学泡桐研究所 

母体文献 河南农业大学学报 

年卷期 2010(2)

页码 145-150

年份 2010 

分类号 S792.43 

关键词 泡桐  AFLP  反应体系  引物筛选 

文摘内容 以豫杂一号泡桐为材料, 通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究, 建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500ng模板DNA, 3U的PstI和Mse I, 在37℃下双酶切3h; 20μL最佳连接体系中为酶切产物15μL, 0.25μmol·L^-1风Pst I接头, 2.5μmol·L^-1 Mse I接头, 1 μL 10×T4 Buffer, 2 U T4连接酶, 22℃连接18h; 20μL最佳预扩反应体系中5μL稀释10倍的连接产物, 100μmol·L^-1 dNTP, 2 U Taq酶, 250μmol·L^-1 Pst L^-1和Mse I引物(P+AGT/M+AGT), 2μL 10×PCR Buffer.20μL最佳选择性扩增反应体系中5斗L稀释20倍预扩增产物, 100μmol·L-^1 dNTP, 2U Taq酶, 350μmol·L^-1 Pst I和Mse I引物(P+AGT/M+AGT), 2μL 10×PCR Buffer.最后, 筛选出了97对适宜于泡桐AFLP分析的引物.