芦笋SRAP反应体系优化及引物筛选

编号 zgly0001390838

文献类型 期刊论文

文献题名 芦笋SRAP反应体系优化及引物筛选

作者 盛文涛  周劲松  汤泳萍  罗绍春  陈光宇 

作者单位 江西省农业科学院生物工程中心  南昌大学生命科学与食品工程学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S644.6 

关键词 芦笋  SRAP  反应体系  优化  引物筛选 

文摘内容 本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25μL的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0mmol/L、上下游引物各0.2μmol/L、dNTPs0.3mmol/L、Taq DNA聚合酶1U以及1×Buffer。扩增程序为:94℃预变性3min;94℃30s、35℃30s、72℃1.5min,5个循环;然后退火温度提高到50℃,35个循环;最后72℃延伸10min。比较琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物的多态性,结果发现:6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好。利用该优化体系筛选引物,从256个SRAP引物组合中筛选出239个,它们具有扩增条带清晰、丰富、重复性好的优点,证明了此优化体系稳定可靠。