台湾杉ISSR反应体系的建立及检测

编号 zgly0000650863

文献类型 期刊论文

文献题名 台湾杉ISSR反应体系的建立及检测

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 杨琴军  袁继林  付强  陈龙清 

作者单位 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室  贵州雷公山国家级自然保护区管理局 

母体文献 华中农业大学学报 

年卷期 2011,30(4)

页码 432-437

年份 2011 

分类号 S791.280.4 

关键词 台湾杉  ISSR  PCR条件  反应体系  引物筛选 

文摘内容 在保持1 UTaq酶和0.2 mmol/L dNTP两个条件不变的情况下,通过对模板DNA的浓度、引物浓度与Mg^2+浓度的筛选,建立了台湾杉的优化ISSR反应体系,即在25μL的反应体系中,含有40 ng模板DNA、1 UTaq酶、0.2 mmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、1.8 mmol/L Mg^2+、2.5μL 10×buffer。扩增程序为: 94℃,4 min;94℃,45 s,51-56℃,45 s,72℃,2 min,40个循环;72℃,7 min。利用这种优化的反应体系,筛选出了10条稳定性强、清晰度高并表现出一定多态性的ISSR引物,并进一步筛选出了这10条引物的最佳退火温度。应用这些引物对分布于湖北利川市星斗山保护区的台湾杉野生居群的20个样品进行了扩增,结果表明,利川星斗山台湾杉居群的多态位点百分率为61.97%,Nei’s基因多样性和Shannon’s信息指数分别为0.136 9和0.216 0。