八角ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

编号 zgly0001437095

文献类型 期刊论文

文献题名 八角ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

作者 吴涛  陈海云  陈少瑜  宁德鲁  冯丹  李勇杰  张艳丽 

作者单位 云南省林业科学院  国家林业局重点开放性实验室云南珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室  云南省森林植物培育与开发利用重点实验室 

母体文献 西部林业科学 

年卷期 2013年02期

年份 2013 

分类号 S573.9 

关键词 八角  ISSR-PCR  反应体系  DNA模板  扩增程序  引物筛选 

文摘内容 以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR-PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR-PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003～0.016 ng,Taq DNA聚合酶0.5～1.0 U,dNTPs 0.2 mmol.L-1,Mg2+浓度2.5～3.0 mmol.L-1,引物浓度0.6～0.8μmol.L-1。扩增程序为,94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物特异温度退火45 s,72℃延伸1 min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。