编号
zgly0001437095
文献类型
期刊论文
文献题名
八角ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选研究
作者单位
云南省林业科学院
国家林业局重点开放性实验室云南珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室
云南省森林植物培育与开发利用重点实验室
母体文献
西部林业科学
年卷期
2013年02期
年份
2013
分类号
S573.9
关键词
八角
ISSR-PCR
反应体系
DNA模板
扩增程序
引物筛选
文摘内容
以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR-PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR-PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003~0.016 ng,Taq DNA聚合酶0.5~1.0 U,dNTPs 0.2 mmol.L-1,Mg2+浓度2.5~3.0 mmol.L-1,引物浓度0.6~0.8μmol.L-1。扩增程序为,94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物特异温度退火45 s,72℃延伸1 min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。