板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

编号 zgly0000359490

文献类型 期刊论文

文献题名 板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

作者 程丽莉  苏淑钗  秦岭  尹伟伦 

作者单位 北京林业大学资源与环境学院 

母体文献 北京农学院学报 

年卷期 2005,20(2)

页码 5-9

年份 2005 

分类号 S663.4  TQ323.8 

关键词 反应体系  叶片DNA  板栗  AFLP指纹图谱  种间亲缘关系  AFLP分析  基因组DNA  AFLP标记  遗传变异分析  CTAB法  选择性扩增  DNA模板  DNA纯度  模板DNA  DNA连接  总DNA  试验条件  分子标记  质量影响  研究结果  反应体积  最佳温度  信号强度 

文摘内容 以初展开的板栗嫩叶为材料, 利用改进的CTAB法, 提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件, 建立了板栗AFLP银染反应体系, 得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明: ①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高, 所含蛋白质、小分子杂质少, 改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析, 形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为: 模板DNA总量500ng, 反应体积为25μ1, 10×Y^+/Tanqo^TM Buffer2.5μ1, BSA 0.8μ1, EcoRI 5U, MseI 5U。连接反应体系中T4-DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时, E-AAC+M-CAA、E-AAC+M-CAT和E-AGT+M-CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E-AGT+M-CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好, 条带分布均匀, 能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带, 可进行中国板栗的遗传变异分析。