麻楝ISSR-PCR反应体系的建立及优化

编号 zgly0001438545

文献类型 期刊论文

文献题名 麻楝ISSR-PCR反应体系的建立及优化

作者 武冲  仲崇禄  张勇  姜清彬  陈羽  陈珍 

作者单位 中国林业科学研究院热带林业研究所 

母体文献 浙江农林大学学报 

年卷期 2013年04期

年份 2013 

分类号 S792.33 

关键词 林木育种学  麻楝  ISSR  PCR条件  优化 

文摘内容 模板DNA、引物、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs),镁离子(Mg2+)浓度、Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的主要因素。以麻楝Chukrasia tabularis叶片基因组DNA为试验材料,系统地测试这6个因素对麻楝ISSR-PCR反应结果的影响。结果表明:最优的反应体系为20μL反应体系中含30 ng模板DNA,1.00μmol.L-1随机引物,0.15 mmol.L-1dNTPs,2.50 mmol.L-1Mg2+,2.50×16.67nkat Taq DNA聚合酶。最佳退火温度为56℃,ISSR-PCR反应程序为94℃预变性5.0 min,94℃变性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,40个循环;72℃再延伸7.0 min,4℃保存。应用优化的ISSR-PCR反应体系对24份麻楝个体材料进行扩增,均能扩增出丰富稳定的条带。