多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计

编号 zgly0000777635

文献类型 期刊论文

文献题名 多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 张红梅  邵元华  龙甜甜  项艳  王进  汤锋 

作者单位 安徽农业大学林学与园林学院  国际竹藤网络中心 

母体文献 安徽农业大学学报 

年卷期 2012,39(3)

页码 412-416

年份 2012 

分类号 S567.23 

关键词 多花黄精  ISSR  正交设计  反应体系  优化  退火温度 

文摘内容 通过对多花黄精ISSR-PCR反应中的Taq酶、buffer(Mg^2+)、模板DNA、dNTP以及引物5个关键因素进行了5因素4水平的正交设计试验,确立了适合多花黄精基因组DNA的稳定性强、扩增最多数量谱带的ISSR-PCR最优反应体系,即25μL的反应体系中含有1.0 U Taq DNA聚合酶,3.5 mmol.L-1buffer(Mg^2+),80 ng模板DNA,0.08 mmol.L^-1dNTP和0.16μmol.L^-1引物。采用建立的多花黄精ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验,确定了引物UBC841的最适退火温度为54.8℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行黄精种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了良好的技术基础。