杨树ISSR反应体系的建立及正交设计优化

编号 zgly0000530704

文献类型 期刊论文

文献题名 杨树ISSR反应体系的建立及正交设计优化

作者 汪结明  项艳  吴大强  孙志娟  蔡诚 

作者单位 安徽农业大学林学与园林学院 

母体文献 核农学报 

年卷期 2007,21(5)

页码 470-473,513

年份 2007 

分类号 S661.1 

关键词 杨树  ISSR  正交设计  反应体系  优化 

文摘内容 采用正交设计的方法,对杨树ISSR-PCR反应中5个因素(Taq酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTP和引物)在4个水平上进行优化试验。建立了适合杨树的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR-PCR最佳反应体系,即25μl的反应体系中含有1×buffer,0.12mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,3.5 mmol/L Mg^2＋,1.5UTaqDNA聚合酶和40ng模板DNA。对杨树ISSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验,发现引物W95142的最适退火温度为56.1℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行杨树种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。