α-半乳糖苷酶基因Mell在毕赤酵母中的组成型表达

编号 zgly0000405277

文献类型 期刊论文

文献题名 α-半乳糖苷酶基因Mell在毕赤酵母中的组成型表达

作者 张学文  唐香山  张金谌  章怀云 

作者单位 湖南农业大学生物科学技术学院  中南林业科技大学生命科学与技术学院 

母体文献 农业生物技术学报 

年卷期 2006,14(2)

页码 269-272

年份 2006 

分类号 S188 

关键词 α-半乳糖苷酶  Mell基因  重组质粒pGAPZα-Mell  组成型表达 

文摘内容 用PCR方法从酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH109中扩增出α-半乳糖苷酶的Mell基因,将其克隆至整合型载体pGAPZαA中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pGAPZα-Mell.将线性化的重组质粒pGAPZα-Mell电击转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71,在含有100 mg/mL zeocin和预先涂布有X-α-gal的YPDS平板上选择蓝色阳性菌落.发酵培养酵母的上清经SDS-PAGE分析,在53 kD处有特异带;经非变性PAGE凝胶电泳,与显色底物的反应,检测到α-半乳糖苷酶活性带.重组菌pGAPZα-Mell/KM71摇瓶发酵6 d后,培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12 U/mL。