正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

编号 zgly0001625992

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

作者 郑轶琦  王志勇  郭海林  薛丹丹  刘建秀 

作者单位 南京农业大学园艺学院  江苏省中国科学院植物研究所南京中山植物园 

母体文献 草业学报 

年卷期 2008年04期

年份 2008 

分类号 S688.4 

关键词 假俭草  SRAP标记  正交试验设计  体系优化  引物筛选 

文摘内容 以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260μmol/L、引物0.25μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。