正交设计优化假俭草SRAP—PCR反应体系及引物筛选

编号 zgly0000576924

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化假俭草SRAP—PCR反应体系及引物筛选

作者 郑轶琦  王志勇  郭海林  薛丹丹  刘建秀 

作者单位 南京农业大学园艺学院  江苏省中国科学院植物研究所南京中山植物园 

母体文献 草业学报 

年卷期 2008,17(4)

页码 110-117

年份 2008 

分类号 S543.903.7  Q94-33 

关键词 假俭草  SRAP标记  正交试验设计  体系优化  引物筛选 

文摘内容 以假俭草叶片DNA为模板，采用正交试验设计，以Mg^2＋、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平，对假俭草SRAP反应体系进行研究，并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响，建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明，假俭草SRAP—PCR最佳反应体系为：2μL10×PCR buffer、60ng模板DNA、Mg^2＋ 1．50mmol／L、dNTP 260μmol／L、引物0．25μmol／L、Taq DNA聚合酶0．5U，总体积为20μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响，其中以Mg^2＋浓度影响最大，Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证，证明该体系稳定可靠，并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。