8种柱花草属牧草SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

编号 zgly0001617861

文献类型 期刊论文

文献题名 8种柱花草属牧草SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作者 张龙  丁西朋  严琳玲  胡珊娜  白昌军 

作者单位 海南大学农学院  中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 

母体文献 草业科学 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 S541.9 

关键词 柱花草  改进CTAB法  SSR-PCR  体系优化  引物筛选 

文摘内容 柱花草(Stylosanthes)是优良的豆科牧草,叶片中含有大量的多糖多酚,本研究利用改良CTAB法抽提柱花草叶片中总DNA。通过正交试验设计L16(45),确立了柱花草SSR-PCR最佳反应体系:20μL体系中1μL 50ng·μL-1模板DNA,1.6μL 5μmol·L-1引物,1.6μL 10mol·L-1dNTPs,1.2μL 25mol·L-1 Mg2+,0.3μL 5U·μL-1 Taq聚合酶,2μL 10×PCR Buffer(Mg2+free),剩余用ddH2O补足。扩增反应程序为94℃变性40s,Tm(不同退火温度)退火时间40s,72℃延伸45s,循环数35个。利用优化体系对来自7种柱花草的123对SSR引物在8个不同种柱花草中进行转移,共筛选出44对引物在8种柱花草中都能有效扩增,并从中筛选出26对在8个不同种柱花草中富含多态性引物,为今后利用SSR标记对柱花草属的指纹图谱构建、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定与保护等工作提供重要依据。