猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达

编号 zgly0001392959

文献类型 期刊论文

文献题名 猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达

作者 敬晓棋  吴发兴  丛丽媛  张佩君  陈德坤 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  榆林学院生命科学研究中心  中国动物卫生与流行病学中心动物流行病学监测室  陕西省教育学院生物系 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S852.659.2 

关键词 猪圆环病毒2型  ORF2  原核表达 

文摘内容 【目的】构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2原核表达质粒载体,高效重组表达PCV2壳蛋白Cap,为进一步建立PCV2 ELISA的检测方法及Cap蛋白单克隆抗体的制备研究奠定基础。【方法】根据猪圆环病毒2型ORF2基因序列设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的引物,进行ORF2的PCR体外扩增。用扩增的ORF2基因构建pMD18-T-ORF2质粒,经测序检测正确后,与pET-32a(+)连接获得原核表达重组质粒pET-32a-ORF2。重组质粒pET-32a-ORF2转化BL21-ΔE3后用IPTG诱导表达,对获得的纯化表达产物进行了SDS-PAGE电泳、Western blot检测。【结果】PCR扩增得到了预期580 bp的目的基因,连接载体后经测序完全正确;pET-32a-ORF2在BL21-ΔE3得到高效表达,获得以包涵体形式存在的体外重组原核表达PCV2 Cap蛋白;Western blot检测结果表明,所得到的蛋白能够识别PCV2多克隆抗体。【结论】重组质粒pET-32a-ORF2在BL21-ΔE3高效表达重组PCV2 Cap蛋白,且具有免疫学生物活性。