PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建

编号 zgly0001314023

文献类型 期刊论文

文献题名 PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建

作者 赵鸿雁  李俊  丛晓燕  曹帅  王文志  张秀美  王金宝 

作者单位 莱阳农学院动物科技学院  山东省农业科学院畜牧兽医所  山东省农业科学院畜牧兽医所 山东青岛266109  山东济南250022  山东青岛266109 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2006年11期

年份 2006 

分类号 S852.65  Q78 

关键词 猪圆环病毒2型  ORF2  猪繁殖与呼吸综合征病毒  ORF5  真核表达载体 

文摘内容 根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ/XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2/ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCR RT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99%,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型(VR-2332株)氨基酸同源性为99%。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2 ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。