猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0001720816

文献类型 期刊论文

文献题名 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者 乌吉斯古楞  刘亭岐  巨敏莹  张斌  韩宇  刘建奇  宋庆庆  关平原 

作者单位 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室  金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2020年10期

年份 2020 

分类号 S852.651 

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒  糖基化囊膜蛋白GP5  原核表达  多克隆抗体 

文摘内容 为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光分析(IFA)。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。