猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株GP4蛋白的原核表达与纯化

编号 zgly0001570337

文献类型 期刊论文

文献题名 猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株GP4蛋白的原核表达与纯化

作者 车志芬  史西保  张改平  扣莉云  周景明  祁艳华  王爱萍 

作者单位 郑州大学生命科学学院  河南师范大学生命科学学院  河南农业大学牧医工程学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年05期

年份 2017 

分类号 S858.28 

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒  GP4  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 【目的】原核表达和纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP4,为深入了解其结构和功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增PRRSV BJ-4株ORF4基因片段,将其克隆到pMD19-T载体中并进行测序。从测序正确的重组质粒pMD19-T-ORF4中扩增缺失N端及C端疏水序列的基因片段tGP4(truncated GP4),再将其亚克隆到pET-32a载体并转化到大肠杆菌BL21,IPTG进行诱导表达。对表达的重组蛋白进行可溶性分析,使用尿素梯度法进行蛋白纯化,并通过ELISA法检测重组蛋白的免疫活性。【结果】RT-PCR获得了537bp的ORF4。成功构建了原核表达载体pET-32a-tGP4,在IPTG诱导后重组蛋白以包涵体的形式大量表达。使用尿素梯度法获得了纯度较高的目的蛋白,纯化的目的蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合。【结论】使用原核细胞成功表达了PRRSV的结构蛋白GP4,纯化后的重组蛋白具有很好的免疫原性。